PEPperCHIP®プラットフォーム技術
Biospecimen1975レーザーベースのペプチド合成は、精度、スループット、柔軟性を兼ね備えています。標的ライブラリからプロテオーム全体まで、当社の技術は研究に必要なあらゆるニーズに対応する高解像度ペプチドマイクロアレイを提供します。
30万
スポット/分
4.5k
ペプチド / cm²
60+
ペプチドモノマー
2台
プリンター
高密度相互作用マッピングのためのペプチドマイクロアレイプラットフォーム
PEPperCHIP®ペプチドマイクロアレイは、数千の定義されたペプチド配列を単一のガラススライド上に表示し、抗体、血清、タンパク質、HLA結合相互作用の残基レベルでの分析を可能にします。
シーケンスレベルの制御
最大限に重なり合う線状または環状ペプチドの大規模なライブラリ、焦点パネル、置換スキャン、または修飾ペプチドをターゲット生物学の周りに設計します。
ハイスループットスクリーニング
低スループットフォーマット間で候補を分割またはプールするのではなく、1回の実験で数千のペプチドを解析しましょう。
読み取り直通経路
蛍光ベースの免疫アッセイを用いて、結合イベントとペプチド同定をマイクロアレイスケールで結びつけます。
ガラススライドに直接ペプチドを作製できる分子プリンター
液体の液滴や大規模なペプチドライブラリーの除去を用いてスポッティングを行う代わりに、レーザーを用いた方法でアミノ酸物質を直接ガラススライドに移動させる方法を開発しました。これにより、ペプチドを一度に1つのアミノ酸ずつ、実際の免疫測定ツールに直接構築することが可能になります。
レーザー精度とマイクロアレイスケールを組み合わせたオンチップ合成アプローチは、ペプチド品質を維持しつつ材料消費を削減し、プラットフォームの密度と柔軟性の物理的基盤となっています。
1.プリント
活性化およびFmoC保護アミノ酸が、空間的に定義された場所にある特殊コーティングされたガラススライドに沈着します。これを実現するために、私たちは2つの異なる技術のいずれかを使用します。(1) 標準的なオフィスレーザープリンターと似た動作ですが、アミノ酸トナー素材を使うクラシックプリンター、または(2) 次世代のcLIFTプリンターで、ドナースライドを使ってアミノ酸を転写します。
ステップ2 メルトとカップル
印刷サイクル間の加熱工程で活性化アミノ酸が放出されます。これによりチップ表面または以前の残留物への結合反応が始まります。
ステップ3〜4 洗浄と脱保護
洗いによる余剰物質の除去と、N末端Fmoc基の切断による脱保護の後、 次のアミノ酸層を印刷し、結合します。このサイクルは指定された直線ペプチドが合成されるまで繰り返されます。 この段階で単純な線形エピトープマッピングのためのマイクロアレイが完成します。
ステップ5 修飾と環化
線状ペプチドはさらに部位特異的修飾(例:リン酸化)を処理し、最適化された環化ルーチンにより各ペプチドのN末端とC末端間にジスルフィドおよびチオエーテルの橋渡しが可能になります。後者はペプチドループを可能にし、立体構造を模倣して立体構造のエピトープマッピングを行うことができます。
密度、柔軟性、効率的な素材使用を重視して作られています
エピトープマッピングや免疫プロファイリングのプロジェクトでは、数百から数千のペプチド候補をスクリーニングする必要があることが多いです。マルチウェルプレート、既製アレイ、SPOT合成などの従来の手法は、スループット、柔軟性、コストのトレードオフを強います。オンチップ合成は、高密度スクリーニング、カスタム配列、効率的な材料利用を単一のマイクロアレイ形式で実現します。
| PEPperCHIP®ペプチドマイクロアレイ | 従来のペプチドアッセイ(例:ELISA、個別合成) | |
|---|---|---|
| スループット | 1チップあたり11,000ペプチド(クラシック)から45,000ペプチド(cLIFT)まで | マルチウェルプレートアッセイでは通常96〜384ペプチドを使用します |
| ペプチド生成 | アッセイツール上で直接合成 | 各ペプチドは個別に合成、精製、取り扱いされました |
| 物質消費 | 低;オンデマンド合成の利用 | 1回のペプチド合成およびアッセイあたりの量はより多く必要です |
| 配列および化学的柔軟性 | ハイ;任意のカスタムアミノ酸配列(例:置換または突然変異スキャン、PTM) | 合成方法によって中〜高く、バリアントは別々の合成が必要です |
| 費用 | 低;ペプチドの数に関係なくチップごとに支払う | 中〜高;ペプチドごとの支払い |
| アッセイコンテキスト | すべてのペプチドが同じ条件下で同時に試験されました | 実験ごとのプレート間変動 |
高密度レーザープリントペプチドマイクロアレイ
従来のPEPperCHIP®プラットフォームは、レーザー精度と固体位相ペプチド合成を大規模に組み合わせ、プロテオームスケールのエピトープマッピング、大規模な抗体パネル、包括的なスクリーニング研究に最適な高品質なマイクロアレイを生成します。
- スケーラブル容量:標準スライド1枚あたり最大11Kペプチド、拡張スライド形式では75Kペプチドまで
- コンテンツの柔軟性:カスタムライブラリ用の24種類のユニークなモノマー印刷ユニット
- 信頼性の証明:2010年以降、数百の論文で引用
cLIFT:より多くのペプチド、拡張された化学、より豊かなデータ
組合せレーザー誘導フォワードトランスファー(cLIFT)は、PEPperCHIP®プラットフォームにおける最新の革新技術です。ドナースライドを用いたモノマー移動により、cLIFTはオンチップペプチド合成能力を多方面で拡大します。
- 高密度:標準スライドあたり最大45Kペプチド
- 拡張化学:さまざまな修飾ペプチドやその他の特殊合成をサポートします
- 新たな応用分野:ペプチドグリカンへの応答、リン素特異的結合などを探る
一つのツール、複数の研究可能性
抗体の特性解析からバイオマーカーの発見まで、私たちの技術が世界中の研究者を支援してきた多様な方法を探ってみましょう。
FAQ
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マイクロアレイで合成できる最大ペプチド長はどれくらいですか?
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通常、マッピング研究のために7〜15アミノ酸のペプチドを扱いますが、最大20アミノ酸の配列を作成することも可能です。
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アレイ上で複数の修飾を施したペプチドを合成できますか?
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場合によっては可能です。当社のペプチド修飾は、特殊なアミノ酸モノマー（完全なリストはこちらでご覧いただけます）を組み込むことで実現されており、これらは、多くの場合、全長ペプチドの合成後に、追加の反応ステップを経て化学的に修飾されます。これらの反応の中には、他の反応よりも相性の良いものもあります。しかし、当社の合成法では、選択的な脱保護反応を用いて部位特異的な修飾を体系的に付加しているため、同一のアレイ上で複数の修飾を試験することが可能です。お客様の研究課題に最適な研究デザインを確実に構築できるよう、マイクロアレイの設計に関する打ち合わせの際に、これらの詳細についてご説明いたします。
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ペプチドアレイではどの程度のアミノ酸や修飾を使用可能ですか?
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20種類のL型およびD型アミノ酸に加え、当社では、特殊なモノマー（例：シトルリン化残基）や追加の化学修飾（例：リン酸化）を用いて修飾ペプチドを合成できる、さまざまな特殊な構成要素も取り揃えています。完全なリストはこちらをご覧ください。
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印刷されたアレイの安定性はどの程度で、複数回使うことは可能ですか?
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PEPperCHIP®マイクロアレイは、4°Cの暗所で保管するのが最適です。慎重に取り扱えば、チップは数ヶ月間安定しています。理論上はアレイの剥離も可能ですが、剥離効率によっては結果に影響が出る可能性があります。1枚のチップに複数のアレイを印刷できるため（印刷枚数はアレイのサイズによって異なります）、実験ごとに新しいアレイを使用することをお勧めします。
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マイクロアレイ上のペプチドの品質はどのように確認しますか?
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当社の製造プロセスはISO 9001認証を取得しており、すべてのマイクロアレイが製造工程の各段階で厳格な品質チェックを経ることを保証しています：
- アミノ酸トナーは、HPLCを用いて定期的に分析されます
- ガラススライドへの表面担持量は、UV-Vis分光法によって測定されます
- ガラススライドのコーティングは、エリプソメトリーを用いて定期的に分析されます
- プリンターのキャリブレーションおよびマイクロアレイチップの識別は、製造プロセスと連動して行われます
- 個々のプリントは目視検査されます
- 定量的なペプチド収量を向上させるため、定期的に二重カップリング工程が実施されます
- 欠失ペプチドの生成を防ぐため、反応しなかったアミノ基はキャッピングされます
- すべてのカップリングおよびコーティング工程は、制御された不活性ガス雰囲気下で処理されます
- すべての洗浄、キャッピング、脱保護工程は、ソフトウェアおよびセンサー制御の合成装置によって自動的に行われます
- 使用または出荷前に、各マイクロアレイのバッチは、厳選された標準血清シグナルを含むペプチドマイクロアレイを用いたコントロールアッセイ、および標準抗体セットで染色された追加のFLAG/HAの組み合わせを用いて分析されます。
