ProScern® CFSE DC-T 細胞アッセイ

高感度かつ汎用性の高いProsScern^® DC-T細胞アッセイは、候補タンパク質が、抗薬物抗体反応やその他の望ましくない免疫原性を引き起こす可能性のあるヘルパーCD4+ T細胞の増殖を誘導するかどうかを測定します。

CD4+ T細胞の増殖は、細胞増殖の感度の高い指標であるCFSE色素の希釈法を用いたフローサイトメトリーによって測定される。

このアッセイでは、完全に調製されたタンパク質が使用されており、タンパク質の相対的な抗原性をin vitroで極めて正確に比較することができる。

ProScern^® CFSE DC-T細胞アッセイ技術に関するプレゼンテーション

ProScern^® DC-T細胞アッセイによる全タンパク質免疫原性スクリーニング

全タンパク質をスクリーニングするためのProScern^®樹状細胞（DC）-T細胞アッセイは、幅広い用途があります。このアッセイにより、前臨床段階において、任意の数の薬剤候補について、T細胞による抗原性を包括的に比較することが可能です。さらに重要な点として、このアッセイは、タンパク質配列以外の要因が抗原性に及ぼす影響を評価するためにも利用可能です。こうした差異には、バイオシミラーの比較、タンパク質の修飾、分解産物、併用療法で投与される化学物質、および製造プロセス、添加剤、製剤、安定性に関連するその他のパラメータの比較などが含まれます。

さらに、特に当該抗原が応答するT細胞の機能を変化させる場合など、抗原を用いてPBMCを直接刺激することが不可能な場合もある。このようなアッセイへの干渉を避けるため、樹状細胞を用いて抗原を提示することで、異なる候補化合物の相対的な抗原性を直接比較することが可能となる。

ProScern^® DC-T細胞アッセイ法の概要

本アッセイでは、ProImmune社が保有する、高解像度のMHCクラスII組織型が判定済みの健常ドナーサンプルバンクからのサンプルを使用します。ドナーコホートは、特定の対象集団を代表するように、あるいは世界人口に見られる対立遺伝子頻度を再現するように選択することができます。通常、研究の規模に応じて、40～50名のドナーからなるコホートが使用されます。

ドナー由来のPBMCを単球の供給源として用い、定義済み培地で培養して未熟な樹状細胞を生成する。 樹状細胞に試験抗原（全タンパク質）を負荷した後、定義済み培地でさらに培養することにより、より成熟した表現型へと誘導する。同一ドナーの検体由来のPBMCにCFSEを標識し、抗原でプライミングされたDCとともに7日間培養する。各DC-T細胞培養には、未処理の対照ウェルが1セット含まれる。また、このアッセイには、2つの強力な全タンパク質抗原からなる参照抗原対照も組み込まれている。

免疫原性を評価するための応答指標

免疫原性を評価する際には、研究コホート全体におけるドナー細胞応答の頻度を考慮することが適切である。2つ以上の独立したドナー検体において陽性応答（バックグラウンドを上回る刺激の割合が0.5%を超える）が認められた場合は、潜在的な in vivo T細胞応答の兆候であるとみなされる。また、ドナー細胞の陽性反応の強さを考慮することも重要である。これは、各薬剤について、適格と認められたドナー全体で得られたバックグラウンドを超える刺激の割合の平均値を算出することで決定される。 反応指数 は、反応の強さの値に反応を示したドナーの頻度を乗じることで算出される。この指数は、反応の頻度のみに基づく解析手法よりも、免疫原性のレベルをより適切に表している。

2つのT細胞アッセイのいずれかでドナー検体から陽性反応が認められた場合、そのドナーによって提示された6つのHLAクラスII対立遺伝子のうち、少なくとも1つを介して増殖性免疫応答が誘導されたことになる。

図3から明らかなように、完全ヒト抗体である薬剤4は、ProScern^® DC-T細胞アッセイにおいて、応答指数が最も低く、in vitroでの免疫原性が最も低いことが示されました。予想通り、ヒト化抗体（薬剤2および薬剤3）はそれに次いで低い免疫原性を示し、キメラ抗体（薬剤1）は最も高い免疫原性を示しました。治療用タンパク質ごとに免疫原性の程度は異なり、ProImmune DC-T細胞アッセイではこれを直接定量することができます。

プレゼンテーション

このプレゼンテーションでは、エーザイの彭李博士が、リード抗体の選定に「ProScern® DC-T細胞増殖アッセイ」を用いてProImmune社と協働した経験について語っています。

ProScern^® DC-T細胞アッセイ結果に関する論文ピックアップ

Steven et al., Front Immunol. (2017); 8: 1361. “In Vitro Maturation of a Humanized Shark VNAR Domain to Improve Its Biophysical Properties to Facilitate Clinical Development”.
doi:10.3389/fimmu.2017.01361

Jambari et al, PLoS One (2021) Apr 29;16(4). “Effect of O-linked glycosylation on the antigenicity, cellular uptake and trafficking in dendritic cells of recombinant Ber e 1”.
doi:10.1371/journal.pone.0249876

ProImmuneの樹状細胞培養に関する専門知識

当社の「ProScern^® DC-T細胞増殖アッセイ」および「ProPresent^® 抗原提示アッセイ」の開発を通じて、樹状細胞を扱う分野において豊富な専門知識を有しています。  これらの専門知識を必要とするアッセイをお求めの場合は、 弊社までお問い合わせください。弊社との連携がお客様の研究にどのようなメリットをもたらすかをご検討ください。弊社の 特別アッセイサービス が、お客様の研究プログラムに決定的な違いをもたらすかもしれません。

文献リスト

Jambari, N. et al (2021) Effect of O-linked glycosylation on the antigenicity, cellular uptake and trafficking in dendritic cells of recombinant Ber e 1. PLoS One 16: 10.1371/journal.pone.0249876 [PubMedID: 33914740]

Steven, J. et al (2017) In Vitro Maturation of a Humanized Shark VNAR Domain to Improve Its Biophysical Properties to Facilitate Clinical Development. Frontiers in Immunology. [PubMedID: 29109729]